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    質粒電泳3條帶?5條帶?一文告訴你原因

    發布時間: 2024-06-04  點擊次數: 1248次

    1.相信很多小伙伴將質粒電泳后發現,質粒不是單一條帶,而是出現了很多條帶,例如下圖:

                                       質粒電泳3條帶?5條帶?一文告訴你原因


    2.質粒為什么出現這樣的情況?

    一般理解來說,質粒DNA應如圖2(左)所示的簡單環狀結構。然而,雙鏈環狀DNA的分子軸變形或雙螺旋的扭曲,導致閉合環狀DNA中每個螺旋轉彎的實際堿基對數量發生變化,或者導致螺旋軸發生規則的空間變形,產生拓撲結構,形成質粒DNA的超螺旋性狀(圖2右)。

    質粒電泳3條帶?5條帶?一文告訴你原因


    因此,不同的拓撲結構將使質粒DNA形成多種形式,包括共價封閉圓形(CCC)形式、開放圓形(OC)形式(也稱為“缺口形式")和線性形式(通常通過奇特的限制性消化獲得)。在CCC形式中,兩條DNA鏈是共價閉合的,DNA是超螺旋的。這種亞型的結構最緊密。如果DNA斷裂產生缺口,就會產生OC,卷曲也就消失了。當兩條線在同一位置斷裂時,就會產生線性形式。此外,質粒可能以寡聚體形式出現,例如串聯體,而串聯體又可能以不同的異構體形式存在。所有這些形式都可以通過瓊脂糖凝膠電泳觀察到。但出現多少種條帶會根據你的質粒提取技術、質粒的新鮮程度、電泳液的配置以及瓊脂糖凝膠的配置等有所不同。


    2.怎么區分質粒的電泳條帶?

    一般來說,質粒遷移速度由快到慢分別是共價封閉原形(超螺旋)形式線性和開放圓環(開環)形式,并伴隨著其他形式。原因是:電泳DNA遷移速率與分子大小和構象相關,分子構象越大,空間位阻阻力越大。超螺旋結構較為緊密,因此跑的快;開環質粒由于DNA斷開,阻力增大,因此跑的最慢。


    3.怎么驗證質粒是否可用?

    綜上所述,質粒存在多少條帶與多種因素相關,沒有存在絕對的衡量標準。但如果用限制性內切酶消化質粒DNA,只會出現一條清晰的條帶。并且,由于酶切形成線性化DNA片段,其電泳遷移速率會比對照組原始質粒的超螺旋結構速度慢,可以檢驗質粒是否被切開。


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