一、材料

1. 緩沖液、溶液和試劑

去除 RNA 酶的雙蒸水

10XRT-PCR 緩沖液（去除 RNA 酶的雙蒸水，100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)

2. 酶和酶緩沖液

MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（100~200U/ul)

SUPERaseINRNA 酶抑制劑（20U/ul;Ambion)

3. 核酸和寡核苷酸

dNTP 混合物（10 mmol/L，包含所有四種 dNTP)

隨機(jī)引物（5umol/L)

總 RNA(達(dá)到 2.5ug)

4. 實(shí)驗(yàn)器材

薄壁的 PCR 管

二、方法

1. 在冰上加 2ul50umol/L 的隨機(jī)引物到薄壁的 PCR 管中（一個反應(yīng)一管)。

2. 加入 2.5ug 的總 RNA。

3. 加入 4ul 的 10 mmol/LdNTP 混合物。

4. 添加去除 RNA 酶的雙蒸水（RNaSe-freeH20)，使體積達(dá)到 16ul。

5.70°C 加熱 10min, 變性二級結(jié)構(gòu)，然后立即放在冰上。

6. 加 2ul 的 10XRT-PCR 緩沖液。

7. 加1ul 的 20U/ulSUPERaselN。

8. 加1ul 的 100~200U/ulMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶。

9.42°C 溫浴 1h。

10.95°C 加熱10min, 滅活逆轉(zhuǎn)錄酶。

11. 繼續(xù)擴(kuò)增步驟或停止反應(yīng)，-2°C 儲存。

深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。